METODO DEI DIDEOSSI DI SANGER
Il DNA può essere sequenziato generando frammenti per mezzo di una interruzione controllata della replicazione enzimatica. Si utilizza la DNA polimerasi I per copiare una particolare sequenza di DNA a singolo filamento. La sintesi utilizza come primer un filamento complementare che si può tenere mediante enzimi di restrizione o sintetizzata chimicamente. Oltre ai quattro desossiribonucleotidi trifosfato marcati radioattivamente , la miscela di incubazione deve contenere un analogo 2’, 3’ dideossi di una base, l’incorporazione di questa blocca la crescita della nuova catena perché privo del terminale ossidrilico in 3’ necessario per formare il successivo legame fosfodiestere, vengono così prodotti frammenti di lunghezza diversa tutti con l’analogo dideossi all’estremità 3’. Le quattro serie di frammenti di terminazione della catena vengono sottoposti a elettroforesi e la sequenza delle basi del nuovo DNA viene letta dall’autoradiogramma delle quattro linee.
METODICA DEL SOUTHERN BLOTTING